SIGMA蛋白酶K的应用

SIGMA蛋白酶K采用基因突变技术，对基因进行定点突变后，将其重组到酵母染色体上，利用发酵技术，通过诱导获得高活性的重组SIGMA蛋白酶K，通过基因改造后，提高大大提高了酶的活性，SIGMA蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。

在pH4到pH12的条件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的降解。此酶经脱色和色谱纯化去除了RNA和DNA，也检测不到其它杂酶活性。

由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，主要用在基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶，也可以于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质。

 

SIGMA蛋白酶K应用

SIGMA蛋白酶K的应用主要在实验室，在生物学实验中应用广泛。

（1）尤其适用于DNA、RNA 提取过程中抑制核酸酶；

（2）用于原位杂交，处理组织碎片以保证的探针筛选；

（3）通过修饰细胞膜上的蛋白质和糖蛋白以确定蛋白质在膜上的位置；

（4）准备菌落转移时除去细胞碎屑；

（5）通过激活细菌自溶因子促进细胞溶解；

（6）为脉冲电场凝胶电泳、RT-PCR等准备无DNase、RNase的样品；

（7）有助于从组织中线粒体提取；

（8）传染性海绵状脑病的研究中用于分解脑组织样品中的蛋白朊病毒；

（9）指纹印迹。