细胞核提取试剂盒

细胞核提取试剂盒

一，试剂盒组份

二，细胞核提取试剂盒说明

用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的细胞核的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，性能稳定。

三，操作步骤

1. 样本处理

a. 组织匀浆：称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨组织20次；有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b. 培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 10⁷个细胞，加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞，再加入50ul Reagent A，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。

2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700× g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀；

3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上,4℃， 700 × g 离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底；

5. 弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉，1000 × g 离心10min ，弃上清，得较纯的细胞核沉淀；

6. 用50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

四 注意事项：
1. 为保证获得完整的细胞核，*是全程低温操作。第二是快速。第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的zui关键环节。与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

五 储存：四周内使用可4℃储存，长期置-20℃

转速与离心力换算

G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；

 [rpm] ２即：转速的平方； R为半径，单位为厘米。